Hızlı DNA Sindirimi 5-15Min Enzim BsaI Biyokimyasal Reaktif CE Onaylı

Enzimler BsaI

enzimler, 5-15 dakikada hızlı DNA sindirimi için tasarlanmış bir dizi kısıtlama enzimidir.enzimler, plazmit, genomik ve viral DNA'nın yanı sıra PCR ürünlerini sindirmek için kullanılabilir.Tüm enzimler, evrensel tamponda üstün aktivite gösterir, bu nedenle enzimatik sindirim reaksiyonu sistemini basitleştirir.Ayrıca, enzimler, substrat fazlalığının veya zor şablonların kolay sindirilmesine izin vererek mükemmel enzim fazlalığı sağlar.

Nakliye ve Depolama

Bileşenler buz paketi ile gönderilir ve -20°C'de 2 yıl saklanabilir.

Kesim Alanı

5'-GGTCTC(N)1↓-3'

3'-CCAGAG(N)5↑-5'

Önerilen Reaksiyon Koşulları

1× FuniCut™ Tampon;37℃'de inkübe edin.

Termal İnaktivasyon

20 dakika boyunca 80°C'de inkübasyon.

Kalite kontrol

1. Faaliyet tanımı:1 μg pPIC9K DNA, 1 μL enzim ile 37°C'de 15 dakikada 20 μL toplam reaksiyon hacminde tamamen sindirildi.

2. Uzatılmış Kuluçka/Yıldız Aktivitesi Testi:1 μg pPIC9K DNA'da saptanabilir bozulma yok 37°C'de 3 saat süreyle 1 μL FuniCut™ BsaI ile inkübasyon sırasında meydana gelen nükleaz kontaminasyonu veya yıldız aktivitesi nedeniyle.Daha uzun kuluçka, yıldız aktivitesine neden olabilir.

3. Ligasyon ve Yeniden Bölünme (L/R) Testi:Optimal koşul altında 1μL enzim ile sindirildikten sonra, sindirimden elde edilen geri dönüşüm ürünü 22℃'de T4 DNA Ligaz altında bağlanabilir.Ligasyon ürünü enzim tarafından yeniden bölünebilir.

4. Spesifik Olmayan Endonükleaz Aktivitesi:1 μL enzimin 1 μg süper sarmallı plazmit DNA ile 37°C'de 4 saat kuluçkalanması, süper sarmal durumunda hiçbir değişiklikle sonuçlanmadı.

Talimatlar

1. Farklı DNA'nın Hızlı Sindirimi Protokolü

1.1 Aşağıdaki reaksiyon bileşenlerini belirtilen sırada buz üzerinde birleştirin:

[Not]: *Saflaştırılmış PCR ürünleri için.10× miktarıFuniCut™ Tamponsaflaştırılmamış PCR ürünlerinde kalan iyonik kuvvet nedeniyle 2 μL'ye düşürülebilir.PCR ürününün, klonlama için kullanılacağı zaman, sindirimden önce saflaştırılması tavsiye edildi.

1.2 Yavaşça karıştırın (vortekslemeyin) ve aşağı doğru döndürün.

1.3 37°C'de 15 dakika (plazmit DNA) veya 15-30 dakika (PCR ürünü) veya 30-60 dakika (genomik DNA) için inkübe edin.

1.4 Opsiyonel: 80°C'de 20 dakika ısıtarak enzimi inaktive edin.

2. DNA'nın Çift ve Çoklu Sindirimi

2.1 Her enzimden 1 μL kullanın ve reaksiyon koşullarını uygun şekilde büyütün.

2.2 Reaksiyon karışımındaki enzimlerin birleşik hacmi, toplam reaksiyon hacminin 1/10'unu geçmemelidir.

2.3 Enzimler farklı reaksiyon sıcaklıkları gerektiriyorsa, daha düşük bir sıcaklık gerektiren enzimle başlayın, ardından ikinci enzimi ekleyin ve daha yüksek sıcaklıkta inkübe edin.

3. Plazmid DNA Sindirim Reaksiyonunu Büyütmek

[Not]: Su termostatında, metal termostatta veya kum termostatında inkübasyon.Toplam reaksiyon hacmi 20 μL'yi aşarsa kuluçka süresini artırın.

DNA'daki Tanıma Sitelerinin Sayısı